一．梯度材料：
　　血清脂蛋白密度较低，常用的梯度材料为Nacl,NaI,Kbr,KI等，常用的缓冲剂为ED。
 
表一 常用梯度材料的配置及密度（20°C）
名称 配置 密度（g/ml）
Nacl 0.196M 1.006
NaBr 0.804M 1.063
NaBr 2.705M 1.21
KBr 0.747M 1.063
KBr 1.496M 1.21
NaCl+KBr+EDTA 153gNaCl+354gKBr+10ml
0. 2MEDTA+水至总量1000ml  1.35
NaCl,NaBr
A液:200gNaCl+800ml水
B 液:400gNaBr+600ml水
C液11.14gNaCl+788.6ml水(ρ=1.006gml) 10ml A液+31.7mlB液
10ml A液+15.6mlB液
10ml C液+2ml 1.35液
4ml C液+6ml 1.35液 1.35
1.31
1.063
1.21

二．预分离：
1. 血细胞与血清分离：
　　离心参数：全血，角转头，3，000rpm×20min
　　结果：沉淀为血细胞，上部为血清。

2. 乳糜粒分离：禁食12小时以上人血浆中乳糜粒含量极少，已进食者因其血浆含乳糜粒高，应先离心去除乳糜粒。
　　离心参数：4 ×10 (g×min),10°C.各种转头转速均可。
　　梯度液配置：离心管下部3/4容积加血浆，上部1/4容积加0。
　　5MnaCl+0.3MEDTA,ph7.4
　　结果：乳糜粒上浮，吸出。

3. 血清蛋白分离：除去球蛋白，白蛋白及其它蛋白质。
　离心参数：（2。5-3）×10 (g× hr), 各种转头均可。如角转头70，000rpm× 6hrs,10°C
　配置：管容量1/3为血清，2/3为1。31g/ml,NaCl+NaBr,搅拌后终密度为1。21g/ml
　结果：管上部1/6容积为血清脂蛋白，下部5/6为其它蛋白。

三． 方法：
1． 顺序浮选法：
a) 超速法：最早使用的方法，4000rpm×24hrs×3次，10°C
NaCl+NaBr梯度按1。006，1。063，1。21顺序浮选，每次在管上部取出不同密度之脂蛋白。操作简单，分辨率高，得率高，费时，成本高。
b) 超高速法：100，000rpm×2.5hrs×2次，10°C, 100，000rpm×4hrs×1次，NaCl+KBr+EDTA梯度按不含密度浮选出VLDL ，LDL，HDL

2． 单次离心法：
a) 单次甩平分离
　　用最高转速为25，000~28，000 rpm,6×40ml甩平转头以1.006g/ml NaCl液及1。35g/ml(NaCl+KBr+EDTA)液配置成从 1。006至1。21的8层不连续阶梯度，最下部用血清与KBr配成1。25g/ml样品液，25，000rpm×4hrs,4oC一次得到VLDL，LDL，HDL不同层区带。
　　用最高转速为40，000 rpm ，6×13ml甩平转头，40，000 rpm×24hrs，20°C，不连续KBr梯度1.006~1.21g/ml,细长管，分层清晰，回收率高，离心时间长

b) 单次垂直管分离：
　　NaCl/KBr或NaCl/NaBr不连续梯度单管容量从5ml到40ml，转速从50，000 rpm~80，000 rpm，离心（0。5-3）hrs,下层用KBr或（NaBr）将血清调至1。3g/ml上层用1.006g/ml,NaCl液，10°C-20°C，增加，减速一次分出。

　　NaCl/Sucrose不连续梯度下层为48%W/W Sucrose,中层血清在4MnaCl中，上层为0。67M NaCl+0.05% EDTA,离心参数同上，时间较长。

c) 区带转头大容量分离：
　　离心参数：区带转头，最高转速30，000~48，000rpm, 容量从650ml~1900ml,每次可分离血清50-150ml,低速加样及卸载，分离转速：大转头（25,000-28,000rpm）×24hrs，小转头（30,000-38,000rpm）×1hrs，10°C-20°C

　　梯度液：NaCl+NaBr或KBr+EDTA不连续或线性梯度，样品在最大密度层，近转头核心处用纯水做隔离层，分离室最外部用高密度NaCl/KBr或NaCl/NaBr作缓冲层。

　　收集：泵出后依此经带流动地的紫外检测仪检测，自动部分收集器收集。

四．讨论：
1：用以上方法分离的VLDL，LDL，MDL，还可以进一步用长离心管缩小不连续梯度密度差，分离出其亚组份。

2：实验质量很大程度上取决于密度标定，配置后可用密度剂或折射仪校核。

3：超分析超离心法可精确分离微量血清脂蛋白，并可测定各种组份（包括其亚组份）的上浮系数Sf。